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养殖场病原确诊新技术--基因试纸卡
来源:http://www.lddc2003.com 作者:918.com 发布时间:2018-09-24 10:46 浏览量:

  养殖场病原确诊新技术--基因试纸卡

   畜禽饲养场作为动物疫病传达的源头,在疫病发作时及时进行病原确诊,采纳相应的应对办法,是现在动物疫病防控的关键环节。

   现在国内动物疫病的病原学确诊试剂挑选规模有限。而在通用的血清学检测试剂中,绝大大都是检测血清中抗体的免疫试剂,其成果更多反响了疫苗免疫效果,对病原感染只能直接剖析,【芝加哥期市】CBOT玉米期货触及无法确诊,山西:加速推进传统产业绿色转型。况且动物在遭受感染后,病毒要在体内埋伏一段时间,动物才会发生抗体,检测成果往往滞后病原感染。能对野毒感染进行辨别的老练抗体检测试剂只需猪伪狂犬的gE抗体试剂盒,由于疫苗的纯化工艺问题,口蹄疫的非结构蛋白的抗体现在无法发生理论上的辨别确诊效果。另一方面能监测疫病病原的试剂的商品化试剂偏少。免疫荧光抗体技能受限于底层饲养场荧光显微镜以及荧光符号抗体的缺少,故在大都底层饲养实验室难以遍及。由于到达市场需求的特异性及活络度并能配对的动物疫病抗体的缺少,免疫试剂中现在的病原检测产品很少,这类产品开发的周期长,不确定性很大,很难应对底层疫病防控的需求。因而饲养场实验室亟需适宜的病原学检测试剂。

   鉴于根据核酸扩增的分子确诊技能发展迅速,荧光PCR及电泳PCR现已被农业部及各省市疫控单位逐渐选用,扭转了疫病确诊中病原确诊技能空白的态势。但对饲养场底层实验室来说,PCR分子确诊技能的运用存在不少阻止:1、分子确诊试剂一般要冷冻保存,本钱高且运送半径有限;2、核酸提取过程杂乱缓慢,底层技能人员操作困难;3、底层单位无力购买价格偏高的PCR扩增仪,底层技能人员也不容易把握仪器操作办法。由于这些难点的存在,分子确诊技能一向没有在我国饲养底层实验室遍及。

   快灵生物开发的基因试纸卡,敞开了现场分子确诊步入饲养场的新时代。它包含基因提取试剂、恒温扩增试剂及免疫层析试纸卡三部分,能常温运送;在常温下一起完结DNA/RNA样品提取,仅需微型离心机或专利磁力架10分钟内完结操作;增加样品模板后将反响管密闭后放置在变温金属浴上保温60分钟,扩增完结后将反响管刺进试纸卡槽后一步按压就发动溶液层析,3-5分钟后即可目视层析试纸的线条显色断定成果。专利申请中的基因试纸卡处理了扩增产品溶液及其气溶胶的走漏污染导致后续样品穿插污染的问题,敞开了现场分子确诊步入了底层饲养场的新时代。基因试纸卡能直接检测到病原,很合适对健康携毒排毒的动物进行筛查,也合适对感染前期的动物进行确诊,大大缩短窗口期。此外,关于稀有病原或俄然迸发的新病原,只需能在基因库中查询到该病原的基因序列,基因试纸卡能最快在一周内研制出来。该基因试纸卡的操作过程以专利磁力架,变温金属浴,两支移液枪为例阐明如下图。

  

 

  

   快灵生物的基因试纸卡检测盒的特色在于:

   1.简略快速提取核酸:快灵生物的核酸提取试剂在常温下10分钟内能一起完结样品中DNA与RNA的提取。现在基因变异最快,危害性最大的疫病往往都是RNA病毒引起的。其他商业化RNA病毒提取试剂一般要求在低温冷冻条件下提取操作,底层单位往往无法完成。快灵生物经过无数次的实验探索,总算制造了共同的基因提取试剂,仅需微型高速离心机或专利磁力架,10分钟内就能完结单份样品的核酸提取。咱们现已在细菌病毒样品,全血与安排样品别离进行了DNA、RNA的提取实验,成果都很杰出。简略的RNA提取试剂是基因试纸卡步入底层运用的根底。

   2.扩增核酸的高活络高特异的快速免疫检测技能:快灵生物经过胶体金试纸完成了基因扩增产品的高活络高特异检测。胶体金试纸具有极高的的检测活络度,如克伦特罗的产品能到达纳克等级(单位ng/ml),而基因扩增技能则能够迅速将超痕量的靶基因特异扩增百万倍。快灵生物将胶体金技能与基因扩增技能完美结合,完成了高活络的核酸检测。我公司对照实验标明,当PCR扩增产品在琼脂糖凝胶电泳上出现弱小信号时,快灵生物的基因试纸卡对稀释100倍的扩增产品仍有显着信号。当LAMP恒温扩增溶液选用染料(如SYBRGreenI)只能检测到弱小信号时,快灵生物基因试纸卡对100倍稀释后的扩增溶液仍有显着信号。因而基因试纸卡能完成更高活络度的信号检测,或许在相同的产品浓度下,能确保更好的信号判别。更重要的是染料检测办法没有特异性,只需溶液中存在必定浓度的核酸就有信号,无法区别信号是来自特异性扩增产品仍是非特异性扩增产品。而基因试纸卡的检测则是引物与探针两层确保扩增产品的特异性,能很好地区别非特异扩增产品。

   3.精美的防污染基因试纸卡:快灵生物专利申请中的防污染基因试纸卡,是现在处理底层单位基因扩增产品污染的最佳计划。虽然在荧光定量PCR和LAMP等办法中,能够不开盖检测,但其运用的反响管并没有严厉密封的结构规划,渗漏与意外开盖依然可能导致污染。快灵生物专利申请中的防污染基因试纸卡的塑料套件中存在多级密封规划,并能接受必定的空气压力差,反响管内的扩增产品被封存在试纸卡中,即便层析试纸上的扩增产品形成了气溶胶也无法扩散出来。

   4.一步操作的核酸恒温扩增技能:快灵生物选用了一步操作的核酸恒温扩增技能,合适底层单位操作人员运用。近年开发出了多种恒温扩增技能,有些技能需求进行多步操作才完成核酸(DNA或RNA)的扩增。快灵生物公司归纳了LAMP技能与RCA技能的特色,首创了新式的恒温扩增技能,能一次增加相关试剂与样品后,在50℃/64℃两个温度下共反响60分钟就能到达层析试纸需求的信号浓度。

   5.基因试纸卡的常温运送:快灵生物的基因试纸卡检测盒中的试剂与物料都能在常温下运送,处理了基因检测试剂对底层单位的物流妨碍。现在绝大部分的基因检测试剂都需求在-20℃的条件下选用干冰运送,使得产品的配送和运用极为不便利。作为农牧业的底层单位,出于疫病防控的需求,畜禽饲养场往往地处市郊或偏僻的村庄。基因检测试剂的常温运送,是基因检测技能进入这些底层单位的先决条件。快灵产品则选用独有的保护剂,对检测试剂中不易保存的成分进行冻干固化,彻底完成了产品的常温运送,给广阔饲养场敞开了基因检测技能的大门。

   6.最习惯底层人员运用的计划:快灵生物的基因试纸卡检测盒的全流程操作简略便利,即便中学文明人员经简略训练就能把握。因而对广阔的底层单位客户,选用基因试纸卡进行疫病检测,彻底不需求额定招聘专业的技能人员。一起基因试纸卡所需配套仪器只需微型高速离心机或专利磁力架,变温金属浴和两支移液枪,需求的装备费用较低,绝大部分的底层单位都能负担得起。


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